بررسی الگوی متیلاسیون dna ژن های bag1، bax و bcl2 در جنین های انسانی با درجات مختلف فراگمنتاسیون حاصل از art

مقدمه : فراگمنتاسیون پدیده ی شایعی است که در بیش از ??% جنین های انسانی که در محیط کشت آزمایشگاهی رشد می کنند مشاهده می شود. یکی از مکانیسم های فراگمنتاسیون، آپوپتوز می باشد. در این مطالعه به منظور دستیابی به ارتباط میان آپوپتوز و فراگمنتاسیون، نقش متیلاسیون dna را در مهار بیان ژن های آنتی و پرو آپوپتوز بررسی می کنیم. روش ها: با استفاده از میکروسکوپ معکوس و بر اساس درجه فراگمنتاسیون، جنین های انسانی در مرحله هشت سلولی به چهار گروه تقسیم شدند: گروه i جنین های با کم ترین میران فراگمنتاسیون، گروه ii جنین هایی با ??%> فراگمنتاسیون، گروه iii جنین هایی با ??%< فراگمنتاسیون، گروهiv جنین هایی که توسط ماده ی القاگر آپوپتوز به نام اکتینومایسین d به صورت آپوپتوزی درآمدند. در ابتدا رنگ آمیزی tunel برای تأیید وقوع آپوپتوز در جنین ها انجام شد. سپس به منظور بررسی بیان کمی ژن های bag1، bax و bcl2 و نیز بررسی وضعیت الگوی متیلاسیون dna نواحی تنظیمی ژن های مورد مطالعه به ترتیب از روش rt-pcr وreal-time pcr و تکنیک بی سولفیت استفاده شد. یافته ها: نتایج رنگ آمیزی tunel نشان داد که جنین هایی با میزان فراگمنتاسیون بالا، دارای اجسام آپوپتوتیک بیشتر می باشند. نتایج بررسی rt-pcr و q-pcr آشکار کرد که بیشترین میزان بیان bag1 در گروه i و کم ترین آن در گروه iv با اختلاف معنی دار می باشد. وضعیت متیلاسیون ناحیه ی تنظیمی این ژن نیز در گروه iv نسبت به گروه i با افزایش معنی دار سطح متیلاسیون (هایپرمتیلاسیون) همراه بود. رونوشت ژن bcl2 در هیچ یک از گروه های آزمایشی مشاهده نشد و توالی های cpg ناحیه ی تنظیمی آن در هر چهار گروه تقریباً به یک میزان متیله بود. بالاترین میزان بیان ژن bax در گروه ii مشاهده شد و داده های حاصل از تعیین توالی بی سولفیتی ژن bax نشان داد که ناحیه ی تنظیمی این ژن در هر چهار گروه به میزان کم متیله (هایپومتیله) می باشد. همچنین تاثیر اکتینومایسین d بر میزان بیان رونوشت ژن های مورد مطالعه در گروه iv نسبت به گروه i با کاهش معنی دار همراه بود. نتیجه گیری: سطح متیلاسیون dna ژن bag1 سبب کاهش بیان این ژن می گردد. بنابراین بیان رونوشت bag1 می تواند به عنوان یک مارکر مناسب جهت تشخیص آپوپتوز در جنین های انسانی به کار رود، در حالیکه رونوشت ژن bcl-2 در جنین های انسانی مرحله ی هشت سلولی نقشی در شناسایی آپوپتوز نداشته و الگوی متیلاسیون dna ناحیه تنظیمی این ژن با عدم بیان رونوشت آن مرتبط است. همچنین وضعیت متیلاسیون ناحیه ی تنظیمی مورد مطالعه ژن bax ارتباطی با میزان بیان mrna این ژن ندارد.